乳酸脱氢酶(LDH)在细胞毒性研究中的应用

乳酸脱氢酶（LDH）是一种重要的氧化还原酶，能够催化丙酮酸与乳酸之间的相互转化，同时也参与NADH与NAD+的相互转化。由于其稳定性，LDH存在于所有类型的细胞中，并在细胞膜受损后迅速释放到细胞培养基中，因此，LDH成为细胞毒性研究中常用的生物标记物。

细胞毒性检测原理

细胞毒性检测试剂盒（乳酸脱氢酶法）为研究细胞毒性提供了一种高效且简便的比色测定方法。在典型细胞毒性试验中，靶细胞与细胞毒性化学试剂或细胞毒性细胞（例如NK细胞或细胞毒性T细胞）共同培养，诱导靶细胞死亡，从而释放LDH。

接下来，将含有LDH的细胞上清液转移至新的96孔试验板中，并与LDH反应混合液混合。在LDH的催化下，NADH与MTT反应，产生NAD+及MTT的还原形式。该还原形式在565nm处具有最大吸光度，其颜色的强度与细胞释放的LDH量成正比。在室温下孵育30分钟后，使用酶标仪读取吸光度值，以评估细胞的存活状态。

实验材料与步骤

本实验需准备以下材料：

• 酶标仪（能测定565nm吸光度）及二氧化碳培养箱
• 透明平底96孔板
• 移液枪及枪头
• 去离子水

实验步骤概述

1. 培养细胞超过24小时，离心以去除颗粒，获得细胞培养上清。
2. 将细胞培养上清加入96孔细胞培养板中，设置6个复孔。
3. 在三个孔中添加20μL目标药物，其他孔添加对照缓冲液。
4. 每孔取100μL转移至新的96孔检测板中。
5. 每孔添加100μL LDH反应混合液，并在37℃下孵育最多30分钟。
6. 用酶标仪读取565nm处的吸光度，并评估药物对细胞的影响。

数据分析

实验结果可根据以下公式计算细胞毒性百分比:

细胞毒性百分比 (%) = (A样本 - A自发) / (A最大释放 - A自发) × 100

其中，A样本为药物处理样本的吸光度，A自发为自发释放的吸光度，A最大释放为最大释放的吸光度。这一指标有助于判断药物对于靶细胞的毒性。

注意事项

• 不同批次或厂家之间的试剂不可混用，以免影响实验结果。
• 在混合组分时应避免产生气泡。
• 保持良好的实验习惯，穿戴适当的防护装备。

以上方法适用于评估细胞间的相互作用及药物的生物效应，为相关研究提供基础数据。使用尊龙凯时的细胞毒性检测试剂盒，能帮助您更好地开展细胞功能研究，实现更高的实验精准度和效率。