操作步骤如下：

1. 细胞洗涤

在培养板中，将已爬好的细胞玻片用PBS浸洗3次，每次3分钟，确保细胞表面无多余成分残留。

2. 固定细胞

用4%的多聚甲醛固定爬片15分钟，随后再次用PBS浸洗玻片3次，每次3分钟，以去除固定剂的残余。

3. 透化处理

使用5% Triton X-100（PBS配制）在室温下透化20分钟。（如细胞膜上有抗原，可跳过此步骤。）

4. 血清封闭

用PBS浸洗玻片3次，每次3分钟，然后用吸水纸吸干PBS，滴加正常山羊血清（注意：二抗来源需为山羊），在室温下封闭30分钟。

5. 加入一抗

用吸水纸去除封闭液，无需再次洗涤。每张玻片滴加足够数量的稀释好的一抗，并放入湿盒中，4℃孵育过夜。

6. 加入荧光二抗

用PBST浸洗爬片3次，每次3分钟。吸水纸吸干多余液体后，滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒中于20-37℃孵育1小时，结束后再次用PBST浸洗切片3次，每次3分钟。

注意：从加入荧光二抗后，后续操作应尽量在暗处进行。

7. 再次血清封闭

用吸水纸吸干多余液体，滴加正常山羊血清，在室温下封闭30分钟。

8. 加入第二一抗

去除封闭液，不洗，滴加稀释好的第二一抗。加入后，需在避光条件下于4°C的湿盒中孵育过夜。（注意：需确保第二种一抗与第一种来源不同，如小鼠与兔）

9. 加入荧光二抗

用PBST浸洗爬片3次，每次3分钟，吸水纸吸干后，再滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒中于20-37℃孵育1小时，最后用PBST浸洗切片3次，每次3分钟。

注意：如果第一种抗体使用的是红色荧光，第二种必须选择不同颜色的荧光。

10. 复染细胞核

滴加DAPI进行细胞核的染色，避光孵育5分钟，随后用PBST洗涤4次，每次5分钟以去除多余的DAPI。

11. 封片和观察

用吸水纸吸干爬片上的液体，使用含抗荧光淬灭剂的封片液进行封片，最后在荧光显微镜下观察并采集图像。

产品信息

尊龙凯时提供的细胞爬片及相关产品涵盖多种规格：

• J060016：24mm圆形细胞爬片，100片/盒，TC处理，伽马射线灭菌，10盒/箱
• J120011：20mm圆形细胞爬片，100片/盒，TC处理，伽马射线灭菌，10盒/箱
• J240012：14mm圆形细胞爬片，100片/盒，TC处理，伽马射线灭菌，10盒/箱
• J480014：8mm圆形细胞爬片，100片/盒，TC处理，伽马射线灭菌，10盒/箱
• J060036：24*24mm方形细胞爬片，100片/盒，TC处理，伽马射线灭菌，10盒/箱

注：尊龙凯时支持定制各种规格的细胞爬片，以满足您的实验需求。